哈佛大学的符号学专家罗伯特·兰登(汤姆·汉克斯饰)在法国巴黎出差期间的一个午夜接到一个紧急电话，得知卢浮宫博物馆年迈的馆长被人杀害在卢浮宫的博物馆里，人们在他的尸体旁边发现了一个难以捉摸的密码。兰登与法国一位颇有天分的密码破译专家索菲·奈芙(奥黛丽·塔图饰)，在对一大堆怪异的密码进行整理的过程当中，居然发现一连串的线索就隐藏在达·芬奇的艺术作品当中。这些线索，大家都清楚可见，然而却被画家巧妙地隐藏起来。

　　兰登无意中非常震惊地发现，已故的博物馆馆长（也就是奈芙的祖父）竟然是峋山隐修会（Priory of Sion）的重要成员。峋山隐修会是一个真实存在的秘密组织，其成员包括牛顿、维克多·雨果与达·芬奇等多位历史名人。兰登的直觉告诉他，他和奈芙是在找寻一个石破天惊的历史秘密……

　　 小说《达芬奇密码》是围绕着发生巴黎罗浮宫的一起谋杀案展开的，因此，拍摄这部影片的最佳方案是进入罗浮宫。可是，罗浮宫珍藏着大量艺术品，不可能轻易让一个摄制组进驻。这要感谢法国总统雅克·希拉克，在他的“恩准”下，这部作品才能在外界人士想入非非的地方拍成电影。但是，罗浮宫的标志性物品——达· 芬奇的《蒙娜丽莎》却无法让观众一睹风采。因为，拍电影的灯光可能会对这幅油画造成损害，所以，为了完成拍摄任务，摄制组采用了一个复制品。当然，影片中保存《蒙娜丽莎》这幅油画的房间是真的。